神經(jīng)元原代培養(yǎng)是一種將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,如大腦皮層、海馬、脊髓腦組織等,直接取出后在體外進(jìn)行接種培養(yǎng)的方法。是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織取出后,在體外進(jìn)行培養(yǎng)和研究的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。主要用于研究神經(jīng)元的生物學(xué)特性、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)退行性疾病的機(jī)理等。
1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料:包括培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、培養(yǎng)器具等。
2、取材:通過(guò)異交法得到小鼠胚胎,在胚胎發(fā)育第15-17天時(shí)取材。
3、分離大腦皮層組織:將小鼠胚胎處死后,迅速取出大腦并置于無(wú)菌的PBS緩沖液中。移除大腦的外圍組織,僅保留皮層組織。
4、組織消化:將皮層組織切碎成小塊,加入含有0.05%胰蛋白酶和0.1%DNA酶的消化液,室溫下消化15-20分鐘。
5、離心與清洗:將消化液中的細(xì)胞懸液離心處理,用PBS緩沖液洗滌1-2次,去除消化液中的酶和雜質(zhì)。
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)與分裝:通過(guò)顯微鏡和細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù),稀釋并分裝得到所需細(xì)胞濃度。
7、接種:將細(xì)胞懸液接種到預(yù)先涂覆了聚-L-賴氨酸的培養(yǎng)皿中,使細(xì)胞均勻附著在培養(yǎng)皿表面。
8、添加培養(yǎng)基:加入預(yù)先配制好的培養(yǎng)基,為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子。
9、培養(yǎng)條件控制:將培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中,保持37°C、95%濕度和5%CO?濃度。定期更換培養(yǎng)基以維持細(xì)胞生長(zhǎng)。