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談?wù)勆窠?jīng)元原代培養細胞實(shí)驗的步驟

更新時(shí)間:2023-08-17      點(diǎn)擊次數:918
  神經(jīng)元原代培養是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統的部分組織,如大腦皮層、海馬、脊髓等腦組織直接取出,再接種培養的方法。目前國內、外有關(guān)神經(jīng)元培養的方法較多,但在原代培養中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問(wèn)題。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞,相對于其它細胞而言,神經(jīng)元在體外更難以存活和生長(cháng)。因此,體外培養神經(jīng)元要求的培養方法和營(yíng)養條件均較為特殊。
  神經(jīng)細胞的體外培養技術(shù)是研究神經(jīng)源性疾病的發(fā)病機制、進(jìn)程的一個(gè)重要工具,能很好的、直觀(guān)的反映離體神經(jīng)元的發(fā)育狀況和生理活性,如何建立一個(gè)穩定成熟的神經(jīng)細胞培養體系是神經(jīng)系統疾病體外實(shí)驗研究順利進(jìn)行的基礎。隨著(zhù)基礎醫學(xué)及臨床醫學(xué)研究的逐漸深入,神經(jīng)細胞的體外培養技術(shù)在腦損傷、神經(jīng)障礙性疾病、衰老相關(guān)神經(jīng)疾病方面得到廣泛重視和普及應用。
  神經(jīng)元原代培養細胞實(shí)驗步驟:
  1、75%(體積分數)酒精消毒孕鼠,在無(wú)菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無(wú)鈣、鎂的HBSS液的平皿中(下置冰袋)。
  2、解剖顯微鏡無(wú)菌條件下仔細剝離脊膜及血管。
  3、用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;
  4、去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。
  5、4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養箱內差速貼壁30min;
  6、收集上清,臺盼藍染色計數,按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養箱中培養;
  7、培養第二天,全換液更換為種植液2;
  8、培養第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;
  9、之后每周換液兩次。
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